钟医和杨光还是按照实验步骤再进行,首先,需要制胶和配制电泳缓冲液,制胶用缓冲液和电泳缓冲液应保持一致,用百分之1的tae或tbe即可。
“注意,在制胶过程中注意做好防护,切勿烫伤。”钟医提醒道。
“假好心。我会出事?”杨光没气的说道。
两人,待胶溶液温度下降至60c左右时,滴加少量gelred,振摇混匀后缓慢倾倒人插好梳子的胶槽中,他们尽量不产生气泡,以免影响电泳效果。
待胶凝固并冷却至室温后。即可将其转移至电泳槽中,准备电泳。
下一步,两人依次将样品、对照药材、空白对照加入胶孑l中。
杨光特别小心,手十分稳,没有戳破胶孑l边缘或戳穿胶孔底部。以免影电泳效果。
“他们现在再加加样缓冲液,这样做主要是两个作用。”
“一方面其密度较大,可使样品沉积在胶孔底部,避免样品上浮外溢,保障电泳条带密集紧凑,防止扩散。”
“另一方面,其中添加染色剂。可以在电泳过程中指示前沿。电泳结束后。可将凝胶置于凝胶成像仪上进行检视。”
张兴运说道。
而杨光这么一路实验坐下来,正如张兴运在报告之中所写的那样。
在与对照药材凝胶电泳图谱相应的位置上,在100~250 b应有两条dna条带,空白对照无条带。
只有一点有点问题。
“为什么其中有一条条带中出现弥散的情况?”杨光疑惑的问道。
“出现弥散的原因只可能两种。”钟医想了想回答道:“一方面可能是制胶所用缓冲液与电泳缓冲液不一致,应保持一致。另一种,可能是电泳缓冲液长期未更换,缓冲盐浓度变化,或缓冲液被污染,应及时更换缓冲液。”
钟医的回答打消了杨光的疑惑。
实验做到这儿,杨光也明白了,钟医没有撒谎,张兴运的报告百分之百真实。
整个实验的难点就在于酶切反应。
但是两人都是实验室的好手,自然不会因为这一点小问题出问题。